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为了使CRISPR更具特异性，名记傻瓜都能用。初体都会出各种差错。名记在等待化学反应发生后，初体该基因最可能被敲除——它将不再表达CD32蛋白。名记如果某个个体曾感染过登革热，初体”他说，名记那么CD32可能有助于驱动Zika病毒的初体自我复制。他们自己合成，名记但当我查阅新基因编辑技术CRISPR相关知识的初体时候，水和酶。名记会有一种特别挫败的初体感觉。CRISPR（全称clustered regularly interspaced short palindromic repeats）只是名记听起来吓人，

“看来我们是初体失败了，

DNA序列到货了，名记

CRISPR ：So easy ？ ——一名记者的CRISPR初体验 | Science

2016-11-08 07:55 · angus

但一位研究人员告诉我，就按了吸取液体的按钮。我的任务是将DNA序列从一个小试管移到另一个小试管中。这些序列最终将和那20个核苷酸链接在一起，请参见bit.ly/vid-6312）。然后把CRISPR质粒滴加到不同泳道里。数据库扫描整个人类基因组，

Wagner与我同时进行实验，CRISPR（全称clustered regularly interspaced short palindromic repeats）只是听起来吓人，

当我移取酶的时候，我猜想，我们开始配胶，我们将CRISPR质粒带到电泳仪——一个有电线的托盘上。 “走吧！检查是否其它地方也存在相同的序列——潜在的脱靶位点。

我的凝胶电泳只有一条带，并用gRNA替代这一段序列。“这种时候，形成完整的gRNA。CRISPR在遏制或敲除基因上效果最佳，Cas9还需要一段额外的序列：N-G-G，敲除该基因，但是CRISPR确实很好，他同意担任我的CRISPR指导员。符合我们要求的20个核苷酸序列。就用指尖捂住玻璃管。他指出，但假设购买gRNA要花500美元，是一个经验丰富的攀岩爱好者，一旦成功，Wagner把我们鉴定的CD32序列粘贴到免费数据库Optimized CRISPR Design中，喜欢有条不紊地完成工作。便打算验证一下这句话的真假。Cas9——导向到基因组中的精确位点。这将大大推动Zika病毒相关研究！最后Cas9切割DNA的两条链。用起来非常简单，

是不是真的连傻瓜都能使用CRISPR这一基因编辑工具呢？

我对生物学相关知识有一定了解，这种凝胶电泳是根据分子质量将DNA分成不同的条带。”

但说实话，我做得不好。

我用神奇的移液器把寡核苷酸转移到了质粒管里，我们可以买到向导RNA（gRNA），几天后，我就没有在实验室工作过。用起来非常简单，不是任何傻瓜都能做CRISPR：至少，但是只要按一下，”Wagner安慰我说，

gRNA序列能与我们想要切割的CD32基因上的一段长度为20个核苷酸的序列互补。用聚合酶链反应进行扩增，

CRISPR使用向导RNA将分子剪刀——CRISPR的一部分，酶将切开质粒，毕竟科学家的生活总是容易充满挫折的。并会导致分子剪刀切割错误的位点。

原文检索：

Jon Cohen. (2016) A reporter does CRISPR. Science, 354 (6312): 541.

我却有些望而却步，在Wager的实验室工作台上，CD32中有41个可选片段。我自认为还是比傻瓜聪明得多，来自质粒的条带。我们选择了一个仅存在于CD32中的序列。那时，这个质粒是CRISPR实验定制的，因此我打算试用CRISPR来敲除基因（如果想看视频，

生物学家Roland Wagner（左）指导Jon Cohen进行构建CRISPR系统。基因组中的其它地方也可能存在与这段短序列一样长的片段，但悲剧的是，

现在，当Cas9在20个目标核苷酸后发现N-G-G时，Wagner来自奥地利，我第一次尝试了使用移液枪。” Wagner轻轻地说。然后，添加缓冲液、但一位研究人员告诉我，”

我已经知道，

“你做得很好，他的质粒正确地整合了gRNA和Cas9。傻瓜都能用。在靶向的20个核苷酸外，里面已经包含了Cas9基因。

相关资料显示，该技术看起来非常复杂！实验进展不顺利。然后开始施加电压，但Wagner并不打算这么干。立刻结合并打开DNA双螺旋，这种“脱靶”效应会严重地影响实验结果，我设定了一个宏大的目标：用CRISPR敲除一个免疫基因，）

Roland Wagner是加州圣地亚哥Sanford Burnham Prebys医学发现研究所Sumit Chanda实验室的博士后，可以减少Zika病毒所造成的伤害。我们从细胞中分离出DNA，很简单。我就愉快地开始了我的CRISPR初体验。并有该病毒的抗体，“可能是你吸取酶的时候没吸到。我们终于成功敲除了CD32基因！第二个试管含有质粒——一种起到特洛伊木马作用的环形DNA片段。查找紧挨着N-G-G的、它还含有60个核苷酸的“发夹”序列，他不确定gRNA的价格是多少，自从我30多年前毕业以来，他查找分析了CD32基因的序列，就只要5美金。切除一段DNA，刚开始做实验的时候，用酶切出的小片DNA会形成明显的条带。并使用电泳验证CD32基因已被切成片段。然后Wagner打开另一个网站，然后把一种化学品吸到一个薄的玻璃管里，

为了自制gRNA，便打算验证一下这句话的真假。！

终于完成了一系列操作。我会想回家。我自认为还是比傻瓜聪明得多，其中“N”可以是任何核苷酸。（我的假设是，消除脱靶效应是研究CRISPR的关键目标。我的操作失误了！如果一切顺利，

于是，随后gRNA与目标序列相结合。我们把质粒导入来自胚胎肾的细胞株中。但是，我学会了一种可能是由Louis Pasteur发明的移液技术：我把一根手指放在我的嘴里，如果我们切割其中一个蛋白编码区的DNA，感谢上帝，你得掌握基本的实验室技能。订购该段DNA序列。我拿着一个看起来像喷枪的花式塑料小玩意，CD32具有五个不同的蛋白质编码区。我在把吸头浸入液体之前，就能移取精确体积的微量液体。Wagner指出，吸足了量后，